- EHEB慢性B细胞白血病
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EHEB慢性B细胞白血病
细胞接收后的操作流程与注意事项：
1、如果细胞为贴壁细胞，而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态，请将悬浮的细胞即时离心，加15%血清的*培养基到新的培养皿/瓶继续培养3天；同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的*培养基培养3天。3天后若原瓶或者新瓶中的细胞都没有出现增值而是继续脱落死亡，请及时联系实验室技术人员会跟进解决
2、贴壁细胞生长缓慢；适当提高血清浓度（最高不能超过20%），或可根据该细胞生长密度，考虑胰酶消化后，转移到新的培养瓶继续培养
3、生长不均：贴壁细胞若出现分布不均，成岛状生长，可将细胞进行消化，重悬打散细胞，加入新鲜培养基进行培养
细胞常规培养传代流程（请严格遵照无菌操作）
1、吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2-3ml 0.25%胰酶进行消化细胞（注意把握消化时间，通常控制在1-2min）
2、镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉胰酶，加6-8ml*培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散
3、细胞取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的*培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养
4、注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存
特别注意：（如使用公共实验室或者初次接触细胞培养，建议添加双抗培养）
1、收到细胞后请尽快更换为含15%血清的新鲜培养基，如因特殊情况需要继续使用原瓶，请在原瓶培养基中额外添加10%的血清，（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过72小时）
2、贴壁细胞收到当天切忌立刻消化，请将细胞换液后放置培养箱孵育到第二天再做消化传代，请优先选择直径6cm的培养皿进行传代培养
3、如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时做好照片记录并联系实验室CRL-5870 NCI-H1435 Cells ，公司专业提供美国ATCC细胞库来源正常细胞系、肿瘤细胞系、癌细胞系（三千多种），提供细胞株生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养*的技术支持，让您实验再无烦扰！EHEB慢性B细胞白血病
注：（1），观察细胞在低倍镜（4或5X物镜）下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。
(2)，瓶中运输培养基不能重复再用，请换用加双抗或无双抗的新培养基，细胞冻存后，培养基中可不加任何抗生素。
(3)，有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞脱落，可离心吹打后接种到新瓶内。
常见问题及解决方案
1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。 2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。
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