NK-92MI细胞，人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞

产品名称：NK-92MI

细胞形态：

组织来源：淋巴母细胞

传代情况：P4-5代T25细胞培养瓶

细胞数量：1~3*10⁶细胞/25cm2培养瓶

培养条件：MEMα-培养基(GIBCO,货号12000022，添加NaHCO3 1.5g/L，肌醇 43.2mg/L, 叶酸 8.82mg/L,100-200单位/ml重组 IL-2,β-巯基乙醇 7.8mg/L)，90%；优质胎牛血清

生长条件： 95%空气+5%二氧化碳 37摄氏度

生长状态：悬浮生长

存储条件：50% 完培+40%FBS+10%DMSO 液氮

NK-92是从一位患有急进性非霍奇金淋巴瘤的50岁白人男性外周血单核细胞衍生来的一株白细胞介素-2依赖型NK细胞株。 这株细胞对很多恶性细胞有细胞毒性；铬释放试验显示它能杀死K562和Daudi细胞。 NK-92细胞(经过照射以防止增殖)可以有效地用于血液中白血病的体外免疫清扫而不危及血细胞的功能。 NK-92细胞有以下特征： CD2, CD7, CD11a, CD28, CD45, CD54表面标记阳性，CD56亮；CD1, CD3, CD4, CD5, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20, CD23, CD34和HLA-DR表面标记阴性。

NK-92MI细胞，人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞

对于贴壁细胞，若细胞漂浮：培养瓶不开封，用75%酒精擦拭后平躺置于培养箱内。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，换成新鲜的培养基；如细胞还不贴壁，将细胞离心收集移到新的培养瓶中，原培养瓶加部分新鲜培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。对于悬浮细胞：收到细胞后，将细胞全部离心，去掉旧的培养基，换成新鲜的培养基继续培养。

特别注意：（如使用公共实验室或者初次接触，建议添加双抗培养）

（1）贴壁细胞收到当天有少量或没有飘忽的细胞可以当天换液，因为路途颠簸造成大量飘忽的情况时，请将细胞换液后放置培养箱孵育到第二天再做消化传代，请优先选择直径6cm的培养皿进行传代培养

（2）收到细胞后请尽快更换为含10%血清的新鲜培养基，如因特殊情况需要继续使用原瓶，请在原瓶培养基中额外添加10%的血清，（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过72小时）

（3）如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时做好照片记录并联系SUER技术人员

细胞接收后的操作流程与注意事项：

1）贴壁细胞生长缓慢；适当提高血清浓度（最高不能超过20%），或可根据该细胞生长特性生长密度，考虑胰酶消化后，转移到新的培养瓶继续培养

2）如果细胞为贴壁细胞，而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态，请将悬浮的细胞即时离心，加15%血清的*培养基到新的培养皿/瓶继续培养3天；同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的*培养基培养3天。3天后若原瓶或者新瓶中的细胞都没有出现增值而是继续脱落死亡，请及时联系实验室技术人员会跟进解决

3）生长不均：贴壁细胞若出现分布不均，成岛状生长，可将细胞进行消化，重悬打散细胞，加入新鲜培养基进行培养

细胞常规培养传代流程（请严格遵照无菌操作）

（1）吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2-3ml 0.25%胰酶进行消化细胞（注意把握消化时间，通常控制在1-2min）

（2）注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存

（3）取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的*培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养

（4）镜下观察消化情况，在HS505.T人淋巴结成纤维样细胞生长特性边缘缩小，贴壁松动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉胰酶，加6-8ml*培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散。