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- 细胞培养步骤及注意事项
- 点击次数：2794 更新时间：2020-02-10
- 细胞培养步骤：
1.培养基及培养冻存条件准备：
①准备F-12K培养基（F-12K : GIBCO,货号：21127-022);北美胎牛血清，10%; PS 1%。
②培养条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱 湿度为70%-80%。
③冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
2.细胞处理：
①复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻，加 入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补 加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将 细胞悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检 查细胞密度。
②细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
注意事项：
①收到细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染， 请立即与我们联系。
②所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作， 并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。