您需要准备好细胞所要用到的培养基和相关试剂,虽然所有的贴壁,半贴壁或者悬浮细胞处理方式差不多,但是不同的实验
室培养条件和处理力度还有试剂的批间差这些问题存在,也会导致对细胞处理不当,或者环境的不适应而造成细胞的死亡
1.收到细胞,第1时间要
观察细胞形态是否正常,对于贴壁细胞则要注意看贴壁情况是否很好,观察细胞密度
有疑议及时咨提供细胞的技术人员。由于运输的时间或者温度的变化,很多贴壁细胞在盛满培养基的瓶子里生长的状态和平时
有点不一样,主要是贴壁牢固问冋题。比如29紅,平时贴壁就不是很牢,在装满的培养基瓶子里面,会发生大片的脱落,细胞
聚集在一起,但是细胞生长还是正常的,通过离心收集,加以胰酶的消化,重新打散,又可以正常的贴壁生长
当通过上一步的观察,细胞初步没有任何问题时,进行下一步操作。当收到的细胞密达到8%左右时,则处理如下
弃除瓶中大部分培养基,仅保皕5到1∽L培养所需的常规培养基;或更换新鲜的培养基,置于培养箱中,随后毎夭观察。细胞在
低于正常生长温度情况下,会调整为静止期,或者慢速生长期,必须恢复37度的环境至少3个小时左右,才能重新调整到接近对
数生长期的状态,在对数生长期进行细胞的传代会大大增加传代的成功率,和细胞的存活率。
3.如果经第1步观察发现细胞密度超过90%,并且细胞状态很好时,则复温后2个小时需要立即传代。传代的比例应依据
不同的细胞而定。对于生长比较快,状态稳定,不易受外界景响的细胞可以一次多传几瓶;对于生长较慢,细胞比较薄,状态
容易波动的细胞类型,一冫
些,保证每瓶细胞密度大些,便于稳定生长。至于一些比较陌生的细胞,第1次处理也可以
照第二种情况