（一）无菌操作前的准备工作

培养材料接种时的无菌操作过程除上述各项操作外，还需完成以下无菌操作步骤，从而获得接种的无菌培养材料。

工作人员无菌操作前需用肥皂刷洗双手及手臂，并用流水冲净，并对手臂**后穿戴好**工作服、工作帽和口罩，更换拖鞋，才能进入无菌操作区。如进入层流操作室进行实验操作，应完成缓冲准备区内的淋浴、一次更换**衣帽、拖鞋；手臂**、二次更换**防护衣帽、手套、拖鞋等；再在风淋区进行无菌风淋后方可进入层流操作室。进入无菌操作区后，再用70%～75%的酒精擦拭双手和前臂，完成无菌操作准备工作。

用70%～75%酒精擦洗工作台面后，将已****的实验用品取出，并将操作器械放置在无菌器械支架上，然后开始实验操作。在实验操作过程中，对所有操作器械每次使用后都要进行**，常采用酒精灯火焰灼烧**。

（二）无菌操作步骤

准备工作完成后，对来自于自然生长条件下的外植体，按上述培养材料**方法**后取出，放入已**的培养皿中，然后置超净工作台酒精灯火焰下方，用**剪刀等器械进行适当分离、切割或其它处理后备用。

在酒精灯火焰处将培养容器的瓶塞（盖）轻轻打开，瓶口在灯焰处旋转灼烧，用镊子将培养材料置入培养液上，将镊子在酒精瓶中浸蘸酒精，置酒精灯上灼烧后放回支架，然后迅速灼燎瓶塞（盖）数秒后塞回瓶口。对继代培养材料的无菌操作，需在灯焰处打开瓶塞（盖），继代材料为液体培养细胞时直接用**吸管吸取培养细胞液放入新培养液中；继代材料为固体培养细胞时用**镊子挑取适量材料置新培养液上；继代材料为其他组织时，用**剪刀或其他器械进行培养材料适当切割后，用**镊子将其置于新培养液上（中），然后迅速灼燎瓶塞（盖）数秒后塞回瓶口。