通用细胞冻存液操作步骤以及注意事项

       随着实验室细胞培养的发展，除了原代培养之外，人工开发出来的细胞系的保存越来越重要。冷冻保存细胞系的优点如下：1、减少基因漂移；2、减缓细胞系的衰老；3、稳定表型；4、减少微生物污染及交叉污染机会等。细胞冷冻的原理在于尽可能降低细胞内的晶体形成，减少细胞内水凝固所形成的高浓度溶质对细胞造成的低温损伤，从提高细胞复苏时的存活率。细胞冻存的数量应保证复苏时低温保护剂获稀释，稀释后的细胞浓度扔高于正常传代的细胞浓度为宜，这是因为当低温保护剂稀释以后，该浓度一般不会对细胞造成毒性损伤。

     Leagene 通用细胞冻存液主要由FBS、DMSO等组成，是非常经典的一种无菌冻存液。用于各种哺乳动物原代细胞、传代细胞系、杂交瘤细胞等的冻存。

自备材料：

1、 细胞计数器 2、 细胞冻存管 3、 超低温冰箱或液氮 4、 超净工作台

操作步骤:

1、培养细胞至对数生长晚起，显微镜观察其外观、形态、有无污染等，取状态良好的细胞进行冻存操作。如为贴壁生长细胞，用胰蛋白酶消化并用*培养基终止消化，进行细胞计数；如为悬浮生长细胞，进行细胞计数。

2、离心，弃上清

3、加入适量的通用细胞冻存液，重悬细胞，使细胞浓度达到、ml，置于冻存管中，密封，不要拧的太紧，避免弯曲变形。

4、一般进行冻存。亦可采用-20℃30min，-70℃过夜，后置于液氮罐中长期存储。

注意事项：

1、注意在超净工作台内无菌操作，尽量避免污染。

2、初次使用融化后可在4℃保存1个月，单应减少反复冻融的次数，以免失效。

3、杂交瘤细胞冻存时应定期复苏，检查细胞的活性和分泌抗体的稳定性。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作